ПРЕДИСЛОВИЕ
Известно, что большинство используемых в геронтологии способов увеличивают продолжительность жизни тогда, когда их начинают применять сразу после рождения и мало влияют при использовании во взрослом или пожилом периоде жизни. Однако есть устройства, которые способны увеличивать продолжительность жизни организмов при начале их применения в любом возрасте, и, что особенно важно, это происходит во взрослом, пожилом и даже старческом возрасте. К таким потенциальным геропротекторам можно отнести устройство, названное его разработчиком М. В. Кутушовым «диссимметратор». В книге описаны экспериментальные работы, выполненные с применением этого устройства, для выяснения его влияния на среднюю и максимальную продолжительность жизни нематод вида Caenorhabditis elegans, небольших червячках, хорошо изученных в науке. Также оценили на нематодах совместное действие диссимметратора и перспективной в геронтологии установки Биотрон ЕКОМ изобретателя Е. В. Комракова.
Возможны противопоказания, требуется консультация специалиста.
Книга предназначена для тех, кто интересуется геронтологией, способами омоложения и увеличения активного долголетия, а также для студентов и научных сотрудников биологических и медицинских ВУЗов и организаций.
Ключевые слова: продолжительность жизни, старение, омоложение, диссиммтратор, нематоды, Caenorhabditis elegans, Биотрон, оздоровление.
На обложке представлен прибор диссимметратор Кутушова М. В. Фото соавтора книги Л. Ю. Прохорова
ВВЕДЕНИЕ
В настоящее время предложено множество препаратов и методов, которые на животных приводят к увеличению их средней и максимальной продолжительности жизни (СПЖ и МПЖ, соответственно). К ним относится, например, метод ограничения потребляемой пищи или ограничение калорийности питания. При этом на крысах и мышах получено существенное увеличение СПЖ до 80% и 65%, соответственно. Применение антиоксидантов или других препаратов приводит к более скромным результатам до 20—30%. Причем, методы и препараты максимально увеличивают продолжительность жизни (ПЖ) в том случае, если их начинают применять сразу после рождения (Прохоров, 2021).
Все же наука не стоит на месте, и ученые предлагают методы, препараты или устройства, которые потенциально могли бы увеличить продолжительность жизни тогда, когда их начинают применять во взрослом или пожилом периоде жизни, но они не испытаны до сих пор на различных биологических объектах. К таким потенциальным геропротекторам можно отнести устройство, названное его разработчиком М. В. Кутушовым «диссимметратор». В статье описаны экспериментальные работы, выполненные с применением этого устройства, для выяснения его влияния на СПЖ и МПЖ нематод вида Caenorhabditis elegans, небольших червячках, хорошо изученных в науке. Также оценили на нематодах совместное действие диссимметратора и перспективной в геронтологии установки Биотрон ЕКОМ изобретателя Е. В. Комракова.
ОПИСАНИЕ ДИССИММЕТРИИ БИОМОЛЕКУЛ
Диссимметрия минералов и биологических молекул была открыта в 1847 году французскими учеными Антуаном Бешаном и его учеником химиком Луи Пастером, последний из которых изобрел также прививки и процесс пастеризации. Суть открытия заключается в том, что в живом веществе присутствуют молекулы с левой и правой оптической активностью, причем нет равного количества левых и правых форм молекул. Эту количественную разницу Л. Пастер назвал диссимметрией. С этого времени началась эра изучения природной диссимметрии и источника её происхождения.
Для оценки степени диссимметрии в тканях организма используется определенный параметр, который ввел российский ученый Кутушов М. В. и назвал его «дисс». Теоретические и экспериментальные исследования показали, что в биологических тканях у новорожденного ребенка в возрасте от 1 до 5 лет диссимметрия составляет 176—178 дисс, в 17—19 лет — 144 дисс, в 45—50 лет — 72—78 дисс, в 75—85 лет — примерно 32 дисс. Чем старше человек, тем коэффициент диссимметрии ниже, и при достижении 2—4 дисс наступает смерть (Кутушов, 2005). Это значит, что имеется прямая зависимость между уровнем диссимметрии и старением организма.
Поскольку авторы активно занимаются изучением старения, методами его замедления и сохранения молодого биологического возраста (Прохоров, 2022), то им было интересно исследовать возможность увеличения степени диссимметрии в организме, тем самым приблизить его к более молодому биологическому возрасту и увеличить продолжительность жизни. Для этого было предложено испытать разработанный одним из авторов статьи прибор диссимметратор (Кутушов, 2022) на каком-нибудь биологическом объекте. С этой целью были выбраны небольшие червячки длиной 1 мм, хорошо известные в науке, под названием нематоды вида Caenorhabditis elegans. Экспериментальные нематоды живут на агаровой подложке и во влажной среде (Рис. 1). Из-за малого размера слежение за ними осуществляют с помощью цифрового микроскопа (Рис. 2). Организм червяков состоит по большей части из воды.
Человеческий организм — это по сути — водно-белковая суспензия. У новорожденного ребенка организм состоит из воды на 85%. Вода — не просто самое распространенное вещество в живом организме, она также обладает рядом свойств, играющих важную роль в его биологических процессах. Примерно 2/3 всей воды в организме содержится внутри клеток. Внутриклеточные реакции и метаболизм большинства организмов протекают во внутриклеточной жидкости. Без участия крови, состоящей на 90% из воды, питательные вещества, витамины и минералы не способны самостоятельно транспортироваться к органам и тканям человеческого организма (Кутушов, 2005).
Поэтому, улучшая свойства воды, т.е. увеличивая ее диссимметрию и приближая ее характеристики к свойствам воды в более молодом возрасте, можно стимулировать кровообращение, улучшить метаболизм веществ в организме и тем самым увеличить продолжительность жизни организмов.
РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ УВЕЛИЧЕНИЯ ДИССИММЕТРИИ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ И ВОДЕ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ЗДОРОВЬЯ ЧЕЛОВЕКА И ИССЛЕДОВАНИЯ НА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ
В связи с этим сделано предположение, что если бы удалось повысить уровень диссимметрии во взрослом или старом организме, то это могло предотвратить возникновение различных возрастных заболеваний и даже увеличить продолжительность жизни.
Для увеличения диссимметрии наш отечественный ученый и изобретатель из России Кутушов Михаил Владимирович разработал, запатентовал и изготовил устройство под названием «ДИССИММЕТРАТОР», которое способно повысить уровень диссимметрии, как в биологических жидкостях у живых организмов, так и в обычной воде (Кутушов, 2005).
Далее предположено, что если с помощью диссимметратора повышается уровень диссимметрии, то это может увеличить продолжительность жизни некоторых экспериментальных животных. В перспективе при положительных результатах на животных, можно было бы направить исследования на выяснение возможности применения диссимметраторов в геронтологии для замедления старения людей и в медицине для предотвращения или профилактики возрастных заболеваний.
На основании ранее проведенных исследованиях установили, что при экспозиции диссимметратором в течение 15—20 минут вода достигает коэффициента диссимметрии 36—176 дисс в зависимости от конструкции устройства и перенесенной информации. При некоторых дополнительных манипуляциях, коэффициент можно поднимать и до 178 дисс. Однако, на основании некоторых данных самой «золотой диссимметрией» можно считать 36—144 дисс. Именно такая вода обладает лечебными, профилактическими и омолаживающими свойствами.
Под действием диссимметратора в воде содержание токсинов, таких как соли тяжелых металлов, радионуклиды, пестициды, инсектициды и т.п., значительно уменьшается. Изменяются в лучшую сторону оптическая проницаемость, электропроводность, рН, редокс-потенциал (ОВП), коэффициент поверхностного натяжения. рН становится щелочной и достигает 7.5—8.0, редокс — потенциал 100—200 мЭв. Диссимметричную воду можно приготовить из любой фильтрованной и даже нефильтрованной воды. Для этого емкость с водой помещается на диссимметратор на 15—20 минут. Наведение диссимметрии производится с помощью мультифокальных диссимметраторов.
Исходя из проведенных исследований было сделано заключение, что с помощью таких устройств можно поддерживать диссимметрию не только в воде, но и в живом организме и непосредственно повышать ее.
Для диссимметриизации различных водосодержащих объектов разработаны и изготовлены как стационарные приборы, так и переносные. Одно из переносных устройств показано на рис. 3. Оно выполнено в виде небольшого пустотелого пластмассового диска диаметром 10 см и толщиной 2 см. Вверху в центре диска выполнено отверстие диаметром 2 см. Внутри устройства находятся специальные пластинки и поляризаторы, которые через отверстие влияют на воду или на биологические объекты. На диск можно поставить кувшин с водой или чашки Петри с нематодами.
Действие прибора диссимметратора основано на принципах кристаллографии путем переноса диссимметрии кристалла на объект. Кристаллы — колыбель органической формы жизни. Сама диссимметрия, как основной признак живого точно повторяет поведение кристаллов с различными осями симметрии.
Наведенная диссимметрия вызывается резонансными пластинками и поляризаторами, встроенными в устройство. Диссимметратор способен изменять свойства воды посредством генерации волн де Бройля, менять соотношение лево и право поляризованных молекул воды. Принцип работы диссимметратора основан на инновационной технологии, базирующейся на синтезе знаний в таких областях как кристаллография, оптика и стереохимия. Диссимметратор создан и применяется с 2017 года. Состоит из нетоксичных материалов, прост в использовании и уходе, срок работы — 3 года.
Прибор обеспечивает безопасный способ профилактики многих болезней человека, укрепляет и восстанавливает здоровье. Диссимметрия в воде сохраняется от нескольких часов до 4–8 недель в зависимости от условий хранения. Может зависеть от находящихся рядом электромагнитных источников излучения (телефон, ноутбук и т.п.), нарушается при кипячении или сильном охлаждении (Кутушов, 2005; 2022).
ЧАСТЬ 1. ОЦЕНКА ВЫЖИВАЕМОСТИ И ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ЖИЗНИ НЕМАТОД CAENORHABDITIS ELEGANS ПОД ДЕЙСТВИЕМ ДИССИММЕТРАТОРА
Материалы и методы исследования
С целью выявления возможного влияния диссимметратора на продолжительность жизни животных были выбраны широко известные в науке свободно живущие нематоды вида Caenorhabditis elegans, тип круглые черви, класс Chromadorea, отряд Rhabditida, семейство Rhabditidae, род Caenorhabditis. Популярность нематод началась с исследований свойств этих червей и их генома ученым Оксфордского университета S. Brenner (Brenner, 1973). Явным их преимуществом является небольшая продолжительность жизни от зарождения до гибели от 8 до 30—40 суток в зависимости от температуры обитания, так как они являются пойкилотерными (холоднокровными) организмами. Их применяют в своих исследованиях как генетики, так и геронтологи. Целью авторов книги было найти простые и надежные способы сохранения здоровья людей и увеличения их активного долголетия (Прохоров, 1999, 2021, 2022). Взрослые нематоды имеют длину примерно 1 мм, их вид показан на рис. 1. Для наблюдения за ними и подсчета их числа в нашей лаборатории используется цифровой микроскоп с небольшим увеличением, примерно 30х (Рис. 2), с использованием разработанной нами специальной подставки и дополнительного освещения (не показано).
Для проведения экспериментов диссимметраторы предоставлены ООО «Международный Консультативный Диагностический Медицинский Центр», г. Тула 6.9.2023 г.
Пластмассовые чашки Петри с нематодами для обработки размещали на поверхности диссимметратора (Рис. 3, 4). В чашки диаметром 35 мм вставляли еще по 3 кольца из ПВХ диаметром 14 мм, изготовленные в нашей лаборатории (Рис. 4В). В каждое кольцо заливали агаровую подложку, закладывали питание для нематод и помещали по 1—5 нематоды.
Для эксперимента формировали две группы чашек: 1) контроль; 2) чашки, стоящие на диссимметраторе. Контрольные чашки ставили на расстоянии 3.5 м от диссимметратора. Чашки ставили на диссимметратор на время от 1 до 24 ч в сутки в разных экспериментах.
Предварительно формировалась линия нематод для посева взрослых одиночных нематод в чашки Петри.
Оценивали выживаемость нематод при обработке диссимметратором по сравнению с контролем.
Проведено четыре эксперимента с этой целью.
ЭКСПЕРИМЕНТ №1 от 27.09.2023
Методы
Посев одиночных нематод произведен 26.9.2023 в 14 пластмассовых чашек Петри диаметром 35 мм фирмы «Nunclon» с 3 кольцами ПВХ с внутренним диаметром 14 мм и с толщиной стенок 2 мм. Чашки стояли при температуре 22—23 °С в стерильном ламинарном шкафу при посеве. Первоначальный высев нематод производили из подготовленного пула нематод с определенной продолжительностью жизни 5 суток по 1—3 нематоды в одно кольцо. Возраст нематод на начало действия диссимметратора 6 сут. После первоначального посева нематод чашки с нематодами заворачивали в 2 полиэтиленовых пакета и условно герметизировали путем скручивания концов пакетов с целью предотвращения высыхания агаровой подложки и сохранения стерильности в чашках Петри вне ламинарного шкафа. Затем чашки помещали в холодильник на несколько часов при 5—7 °С. После этого чашки извлекли, сосчитали число нематод в каждом кольце каждой чашки с помощью микроскопа (Рис. 2) и сформировали соответствующие группы по 7 чашек и 38 нематод в группе. Частичное содержание нематод при пониженной температуре позволяет получить более пологую кривую выживания и лучше выявить особенности действия того или иного фактора на жизненные характеристики нематод. Для эксперимента чашки извлекали из холодильника, 7 опытных чашек ставили на диссимметратор (Рис. 3), а контрольные 7 чашек размещали на расстоянии 3.5 м от него.
После проведения обработки опытных чашек все 2 группы чашек помещали обратно в холодильник при 5—7 °С.
Далее ежедневно чашки вынимали из холодильника, переносили в стерильный ламинарный шкаф, где с помощью микроскопа производили подсчет оставшихся живых нематод и добавление, при необходимости, воды для предотвращения высыхания агаровой подложки. Затем проводили экспериментальную обработку нематод на диссимметраторе, а после этого возвращали в холодильник.
В течение экспериментов подбирали время облучения нематод диссимметратором от 1 до 24 ч, чтобы установить оптимальную величину и максимально допустимое значение.
Результаты
Результаты показаны на рис. 5, 6 и в таблицах 1, 2. На рис. 5 видно, что кривая выживаемости нематод при обработке их диссимметратором Кутушова лежит выше, чем кривая выживаемости контрольных нематод, не подвергшихся такому же воздействию.
В нескольких точках кривой на 10, 13, 14 и 15 сутки число живых нематод под действием диссимметратора достоверно выше, чем в контроле. Это говорит о повышении выживаемости нематод при действии диссимметратора.
Отличие в процентах определяли по формуле:
ΔN = ((NД — NК) /NК) х 100%
где NД и NК — число нематод при действии диссимметратора и в контроле, соответственно, в конкретные сутки жизни. Достоверность отличия числа нематод в данные сутки рассчитывали между группами чашек с уровнем значимости р <0.05 по Т-критерию Стьюдента в программе Exel, при этом учитывали число нематод в каждой чашке. Выявлено достоверное отличие в нескольких сутках жизни нематод (Табл. 2). На рис. 5 достоверные отличия в данные сутки показаны двойными стрелками.
Средняя продолжительность жизни (СПЖ) нематод под действием диссимметратора составила 13.5 сут, что достоверно выше, чем в контроле (11.3 сут) на 2.2 сут или на 19.3% при уровне значимости р=0.002 (Рис. 6, табл. 1), а максимальная продолжительность жизни (МПЖ) больше на 17.6% (С диссимметратором — 20 сут, в контроле — 17 сут) (Табл. 1). Отличие СПЖ в процентах определяли по формуле:
ΔСПЖ = ((СПЖД — СПЖК) /СПЖК) х 100%
где СПЖД и СПЖК — средние продолжительности жизни нематод при действии диссимметратора и в контроле, соответственно. Аналогично вычисляли отличие МПЖ.
Обнаружено также постепенное увеличение разницы между числом нематод в группе при облучении диссимметратором с числом нематод в группе без обработки в процентах, с увеличением времени их жизни (Табл. 2).
Выводы
— Диссимметратор Кутушова М. В. не оказывает вредного воздействия на нематоды при однократном непрерывном облучении за время не менее 5 часов.
— Повышается выживаемость нематод при периодическом действии диссимметратора Кутушова М. В. от 1 до 5 ч в сутки.
— За время обработки диссимметратором нематод в среднем 2.9 ч/сут средняя продолжительность жизни достоверно увеличилась на 19.3%, а максимальная продолжительность жизни возросла на 17.6%.
— В нескольких точках кривой выживания на 10, 13, 14 и 15 сутки число живых нематод под действием диссимметратора было достоверно выше, чем в контроле.
— В течение жизни нематод происходит постепенное увеличение разницы между числом живых нематод в группе при облучении диссимметратором и числом нематод в группе без обработки от 2.8% до 400% и более в конкретные сутки.
— Предварительные результаты показывают положительное действие диссимметратора на жизнеспособность взрослых нематод, в результате чего происходит увеличение их средней и максимальной продолжительности жизни.
ЭКСПЕРИМЕНТ №2 от 27.11.2023
Методы
Посев одиночных нематод Caenorhabditis elegans произведен 26.11.2023 в 14 пластмассовых чашек Петри диаметром 35 мм фирмы «Nunclon» с 3 кольцами ПВХ с внутренним диаметром 14 мм и с толщиной стенок 1.5 мм. Чашки стояли при температуре 22—230С. в стерильном ламинарном шкафу при посеве. Первоначальный высев нематод производили из подготовленного пула нематод с определенной продолжительностью жизни 5 суток по 1—3 нематоды в одно кольцо. После первоначального посева нематод чашки с нематодами заворачивали в 2 полиэтиленовых пакета и условно герметизировали путем скручивания концов пакетов с целью предотвращения высыхания агаровой подложки и сохранения стерильности в чашках Петри вне ламинарного шкафа. Затем чашки поместили в холодильник на несколько часов при 5—7 °С. После этого чашки извлекли, сосчитали число нематод в каждом кольце каждой чашки с помощью микроскопа с 30х увеличением (Рис. 2) и сформировали соответствующие группы по 7 чашек и 45 нематод в группе. Для эксперимента чашки извлекали из холодильника, 7 опытных чашек ставили на диссимметратор (Рис. 3, 4), а контрольные 7 чашек размещали на расстоянии 3.5 м от него.
После проведения обработки опытных нематод все 2 группы чашек помещали обратно в холодильник при 5—7 °С.
Далее ежедневно чашки вынимали из холодильника, переносили в стерильный ламинарный шкаф, где с помощью микроскопа производили подсчет оставшихся живых нематод и добавление, при необходимости, воды для предотвращения высыхания агаровой подложки. Затем проводили обработку опытных нематод диссимметратором, а после этого возвращали в холодильник.
В течение эксперимента время обработки нематод диссимметратором составляло от 1 до 15 и 24 ч. Фактическое среднее время воздействия без учета экстремальных значений составило 4 ч в сутки.
Результаты
Результаты показаны на рис. 7, 8 и в таблицах 3, 4, 5. На рис. 7. видно, что кривая выживаемости нематод при обработке их диссимметратором Кутушова М. В. лежит выше, чем кривая выживаемости контрольных нематод, не подвергшихся такому же действию. В нескольких точках кривой с 10 по 16 сутки число живых нематод под действием диссимметратора достоверно выше, чем в контроле. Это говорит о повышении выживаемости нематод при действии диссимметратора. Средняя продолжительность жизни (СПЖ) нематод под действием диссимметратора составила 12.6 сут, что достоверно выше, чем в контроле (10.5 сут) на 2.1 сут или на 20.1% при уровне значимости р=0.0003, а максимальная продолжительность жизни (МПЖ) — больше на 25% (С диссимметратором — 20 сут, в контроле — 16 сут). Отличия в процентах определяли по формуле, описанной в предыдущем эксперименте.
Обнаружено постепенное увеличение разницы между числом нематод в группе при облучении диссимметратором с числом нематод в группе без обработки, с увеличением времени их жизни (Табл. 4). Отличие определяли по формуле предыдущего эксперимента.
Выявлено достоверное отличие числа опытных нематод от числа контрольных в нескольких сутках жизни нематод (Табл. 4).
Установлено также достоверное увеличение СПЖ живых нематод на 12.1% при 50% уровне выживания (Табл. 5). Данный параметр ценен тем, что исключается влияние на учет взрослых нематод их потомства, которое в этот период еще отсутствует или легко отличимо от первоначально размещенных нематод по размеру. Это аналог известного параметра LD50 (Letal Dose 50%).
Выводы
— Диссимметратор Кутушова М. В. не оказывает вредного воздействия на нематоды Caenorhabditis elegans при однократной непрерывной обработке за время не менее 24 часа, не является токсическим и не ухудшает жизнеспособность нематод.
— В то же время при периодическом ежесуточном действии диссимметратора повышается выживаемость нематод.
— За время обработки диссимметратором нематод в среднем по 4 ч/сут, за исключением максимальных значений, средняя продолжительность их жизни достоверно увеличилась на 20.1%, а максимальная продолжительность жизни возросла на 25%.
— В нескольких точках кривой выживания через 4 сут периодического действия прибора и при дальнейшей периодической обработке с 10 по 16 сутки жизни нематод, число живых нематод под действием диссимметратора оказывается достоверно выше, чем в контроле.
— В течение жизни нематод происходит постепенное увеличение разницы между числом живых нематод в группе при облучении диссимметратором и числом нематод в контрольной группе без обработки от 25% до 700% и более в конкретные сутки.
— Предварительные результаты 2-х экспериментов показывают положительное действие диссимметратора на жизнеспособность взрослых нематод, увеличение средней и максимальной продолжительностями жизни нематод, что предполагает неслучайный характер действия прибора.
ЭКСПЕРИМЕНТ №3 от 11.1.2024
Методы
Посев одиночных нематод Caenorhabditis elegans произведен 11.1.2024 в 18 пластмассовых чашек Петри диаметром 35 мм фирмы «Nunclon» с 3 кольцами ПВХ с внутренним диаметром 14 мм и с толщиной стенок 1.5 мм. Чашки стояли при температуре 21—22 °С в стерильном ламинарном шкафу при посеве. Первоначальный высев нематод производили из подготовленного пула нематод с определенной продолжительностью жизни 5 суток по 1—3 нематоды в одно кольцо. После первоначального посева нематод чашки с нематодами заворачивали в 2 полиэтиленовых пакета и условно герметизировали путем скручивания концов пакетов с целью предотвращения высыхания агаровой подложки и сохранения стерильности в чашках Петри вне ламинарного шкафа. Затем чашки поместили в холодильник на несколько часов при 5—7 °С. 12.1.2024 чашки извлекли, сосчитали число нематод в каждом кольце каждой чашки с помощью микроскопа с 30х увеличением (Рис. 2) и сформировали соответствующие группы по 9 чашек и 58 нематод в группе.
В этот же день провели первое облучение экспериментальной группы нематод диссиметратором Кутушова М. В.
Для эксперимента чашки извлекали из холодильника, 9 опытных чашек ставили на диссимметратор (Рис. 3, 4), а контрольные 9 чашек размещали на расстоянии 3.5 м от него. После проведения облучения опытных чашек все 2 группы чашек помещали обратно в холодильник при 5—7 °С. Далее ежедневно чашки вынимали из холодильника, переносили в стерильный ламинарный шкаф при температуре 20—21°С, где с помощью микроскопа производили подсчет оставшихся живых нематод и добавление, при необходимости, воды для предотвращения высыхания агаровой подложки. Затем проводили обработку опытных нематод диссимметратором, а после этого обе группы чашек возвращали в холодильник.
В течение эксперимента время облучения нематод диссимметратором составляло 3 ч в сутки.
Результаты
Результаты показаны на рис. 9, 10 и в таблицах 6, 7, 8. На рис. 9 видно, что кривая выживаемости нематод при обработке их диссимметратором Кутушова М. В. лежит выше, чем кривая выживаемости контрольных нематод, не подвергшихся такому же воздействию. В нескольких точках кривой с 11 по 23 сутки число живых нематод под действием диссимметратора достоверно выше, чем в контроле. Это говорит о повышении выживаемости нематод при действии диссимметратора. Средняя продолжительность жизни (СПЖ) нематод под действием диссимметратора составила 12.6 сут, что достоверно выше, чем в контроле (13.4 сут) на 3.7 сут или на 27.6% при уровне значимости р=0.00002, а максимальная продолжительность жизни (МПЖ) — больше на 26.1% (С диссимметратором — 29 сут, в контроле — 23 сут). Отличие в процентах определяли по предыдущей формуле.
Бесплатный фрагмент закончился.
Купите книгу, чтобы продолжить чтение.